Zastosowanie metody PCR do identyfikacji paciorkowców z grupy mutans

Do grupy paciorkowców próchnicotwórczych mutans należy siedem gatunków (1, 2). Sposród tych gatunków Streptococcus mutans i Streptococcus sobrinus są najczęściej izolowane z jamy ustnej u ludzi i uważane są za najważniejsze bakteryjne czynniki etiologiczne próchnicy zębów u ludzi. Wyniki badań epidemiologicznych sugerują, że obecność S. sobrinus jest w większym stopniu związana z wysoką aktywnością próchnicy niż S. mutans (3, 4). W związku z tym wydaje się, że możliwość wykrywania tych dwóch mikroorganizmów może być interesująca z punktu widzenia zapobiegania i prognozowania próchnicy.

Identyfikacja drobnoustrojów z rodzaju Streptococcus do gatunku klasycznymi metodami jest złożona i czasochłonna. Z tego powodu opracowano komercyjne zestawy do szybkiej identyfikacji tych drobnoustrojów (5, 6). Równolegle z rozwojem szybkich metod diagnostycznych, wykorzystujących fenotypowe właściwości drobnoustrojów, nastąpił dynamiczny rozwój metod biologii molekularnej i co za tym idzie próby zastosowania tych metod do identyfikacji paciorkowców próchnicotwórczych (6, 7, 8).

Celem badań było porównanie dwóch metod identyfikacji paciorkowców próchnicotwórczych: metody reakcji łańcuchowej polimerazy (ang. polymerase chain reaction, PCR) oraz metody opartej na określaniu biochemicznych właściwości tych bakterii z zastosowaniem testów Rapid ID 32 Strep.

Materiał do badań stanowiło 495 próbek śliny stymulowanej dzieci w wieku 12 lat, uczęszczających do różnych szkół podstawowych na terenie Polski. Do wyhodowania kolonii bakterii z grupy S. mutans wykorzystano zestaw Dentocult SM Strip mutans (Orion Diagnostica, Finlandia). Następnie, uzyskane kolonie zostały poddane identyfikacji za pomocą zestawu Rapid ID 32 Strep (bioMerieux, Francja) i metodą PCR (9).

W tym celu wyrosłe kolonie bakteryjne przesiewano z podłoża transportowo-hodowlanego Dentocult SM na podłoże Columbia agar z dodatkiem 5% krwi baraniej oraz inkubowano w atmosferze 5% CO ₂ w temperaturze 37°C przez 48 godzin. Wszystkie kolonie, które na podstawie preparatu i morfologii na podłożu krwawym podejrzewano o przynależność do rodzaju Streptococcus identyfikowano za pomocą testu Rapid ID 32 Strep zgodnie z instrukcją producenta.Testy Rapid ID 32 Strep umożliwiają identyfikację paciorkowców i gatunków pokrewnych na podstawie ich cech biochemicznych, przy zastosowaniu swoistych testów enzymatycznych (ryc. 1 – str. 16). Pasek testowy Rapid ID 32 Strep składa się z 32 zagłębień zawierających suche substraty, których w

To jest tylko fragment artykułu. Aby przeczytać całość, przejdź do Czytelni medycznej.