Działanie in vitro olejku cyprysowego (Oleum Cupressi) na bakterie beztlenowe

*Anna Kędzia¹, Elżbieta Hołderna-Kędzia²

Streszczenie
Wstęp. Cyprys (Cupressus sempervirens L.) należy do rodziny Cupressaceae. Jest wiecznie zielonym drzewem rosnącym w okolicach Morza Śródziemnego. Liście i młode gałązki są wykorzystywane do otrzymywania olejku eterycznego. Olejek cyprysowy zawiera szereg składników, w tym: α-pinen, Δ³-karen_,octan α-terpinylu, cedrol, α-terpineol, β-myrcen, limonen, α-terpineolen, terpinen-4-ol, β-pinen, δ-kadinen oraz sabinen. Olejek wykorzystywany jest w terapii niektórych chorób. Wykazuje działanie przeciwdrobnoustrojowe.
Cel pracy. Celem badań była ocena wrażliwości na olejek cyprysowy bakterii beztlenowych.
Materiał i metody. Bakterie beztlenowe zostały wyizolowane od pacjentów. Łącznie zbadano 62 szczepy bakterii beztlenowych, w tym 36 szczepów pałeczek Gram-ujemnych, 14 Gram-dodatnich ziarniaków i 12 Gram-dodatnich pałeczek oraz 7 szczepów referencyjnych. Wrażliwość (MIC) oznaczono metodą seryjnych rozcieńczeń w agarze Brucella z dodatkiem 5% krwi baraniej, menadionu i heminy. Olejek cyprysowy rozpuszczano w DMSO oraz w wodzie destylowanej, uzyskując stężenia: 20,0, 15,0, 10,0, 7,5, 5,0, i 2,5 mg/ml. Inokulum zawierające 10⁶ CFU w 1 ml przenoszono aparatem Steersa na powierzchnię agaru z olejkiem cyprysowym lub bez niego (kontrola wzrostu szczepów). Podłoża były inkubowane w warunkach beztlenowych w temperaturze 37°C przez 48 godzin w anaerostatach. MIC interpretowano jako najmniejsze rozcieńczenie olejku, które hamowało wzrost badanych bakterii beztlenowych.
Wyniki. Otrzymane wyniki wskazują, że spośród Gram-ujemnych bakterii najbardziej wrażliwe na olejek cyprysowy były szczepy z gatunków Tannerella forsythia (MIC < 2,5-5,0 mg/ml), Bacteroides uniformis (MIC = 5,0 mg/ml), Bacteroides vulgatus, Porphyromonas asaccharolytica (MIC 5,0-7,5 mg/ml) i Porphyromonas levii (MIC = 7,5 mg/ml). Szczepy z rodzaju Fusobacterium oraz z gatunku Bacteroides fragilis były wrażliwe na stężenia w zakresie 2,5-≥ 20,0 mg/ml. Olejek cyprysowy był najmniej aktywny wobec szczepów z rodzajów Prevotella i Parabacteroides (MIC ≥ 20,0 mg/ml). Badane Gram-dodatnie ziarniaki okazały się bardziej wrażliwe. Wzrost szczepów hamowały stężenia w zakresie ≤ 2,5-7,5 mg/ml. Olejek był mniej aktywny wobec szczepów pałeczek Gram-dodatnich (MIC ≤ 2,5-20,0 mg/ml). Wśród badanych szczepów największą wrażliwość wykazały Actinomyces odontolyticus (MIC = 5,0 mg/ml) i Actinomyces viscosus (MIC ≤ 2,5-7,5 mg/ml). Wzrost pałeczek Bifidobacterium breve był hamowany przez stężenia wynoszące 10,0 mg/ml. Badania wskazują, że Gram-ujemne pałeczki były mniej wrażliwe na olejek cyprysowy niż bakterie Gram-dodatnie.
Wnioski. Spośród Gram-ujemnych pałeczek największą wrażliwość wykazały szczepy Tannerella forsythia, Bacteroides uniformis, Bacteroides vulgatus, Porphyromonas asaccharolytica i Porphyromonas levii (MIC = 7,5 mg/ml). Olejek był najbardziej aktywny wobec Gram-dodatnich ziarniaków, natomiast Gram-dodatnie bakterie beztlenowe wykazały wyższą wrażliwość na olejek cyprysowy niż pałeczki Gram-ujemne.

Summary
Introduction. Cypress (Cupressus sempervirens L.) belongs to the family Cupressaceae. It is evergreen, and grows in Mediterranean region. The Cypress leaves and young branches are utilized to produce the essential oil. Cypress oil contain a number of components, in it α-pinene, Δ³-carene_,α-terpinyl acetate, cedrol, α-terpinolene, β-myrcene, limonene, α-terpineolene, terpinen-4-ol, β-pinene, δ-cadinene and sabinene. The oil is used in therapy different diseases. It to have antimicrobial activity.
Aim. The aim of the date was evaluation the susceptibility of anaerobic bacteria to Cypress oil.
Material and methods. The anaerobic bacteria were isolated from patients. The 62 microorganisms, in it 36 strains of Gram-negative rods, 14 Gram-positive cocci and 12 Gram-positive rods, and 7 reference strains were tested. Susceptibility (MIC) was determined by means of plate dilution technique in Brucella agar supplemented with 5% defibrynated sheep blood, menadione and hemin. The Cypress oil was dissolved in DMSO and distilled water to obtain final following concentrations: 2.5, 5.0, 7.5, 10.0, 15.0 and 20.0 mg/ml. Inoculum containing 10⁶ CFU per 1 ml was seeded with Steers replicator upon the agar with oil or without the oil (strains growth control). The agar plates was incubated in anaerobic condition in anaerobic jar in 37°C for 48 hrs. The MIC was interpreted as the lowest concentration of Cypress oil inhibiting the growth of tested bacteria.
Results. The results indicated that from among Gram-negative rods the most susceptible to Cypress oil was the strains from genus Tannerella forsythia (MIC < 2.5-5.0 mg/ml), Bacteroides uniformis (MIC = 5.0 mg/ml), Bacteroides vulgatus and Porphyromonas asaccharolytica (MIC 5.0-7.5 mg/ml) and Porphyromonas levii (MIC = 7.5 mg/ml). The strains from genera Fusobacterium and of Bacteroides fragilis were the susceptible to 2.5-≥ 20.0 mg/ml. The Cypress oil was least active towards Prevotella and Parabacteroides strains (MIC ≥ 20.0 mg/ml).The tested Gram-positive cocci were more susceptible. The growth of the strains were inhibited by concentrations in ranges ≤ 2.5-7.5 mg/ml. The oil was minor active towards Gram-positive rods (MIC ≤ 2.5-20.0 mg/ml). Among the strains the genus of Actinomyces odontolyticus (MIC = 5.0 mg/ml) and Actinomyces viscosus (MIC ≤ 2.5-7.5 mg/ml) were the most susceptible. The growth of rods of Bifidobacterium breve was inhibited by concentrations 10.0 mg/ml. The data indicates that the Gram-negative rods were the less susceptible than Gram-positive bacteria to cypress oil.
Conclusions. Among Gram-negative rods the most susceptible were the strains Tannerella forsythia, Bacteroides uniformis, Bacteroides vulgatus, Porphyromonas asaccharolytica and Porphyromonas levii. The oil was more active against Gram-positive cocci. Gram-positive anaerobic bacteria demonstrate the more susceptible to Cypress oil then Gram-positive rods.

To jest tylko fragment artykułu. Aby przeczytać całość, przejdź do Czytelni medycznej.