Wpływ inhibitora kinaz Src, SU6656, na komórki linii megakarioblastycznej Meg-01 (pbsz Ph⁺)

*Joanna Kamińska¹, Edyta Klimczak-Jajor¹, Urszula Bany-Łaszewicz¹, Janusz Skierski²,
Ewa Zdebska¹, Jerzy Kościelak¹

Streszczenie
Wstęp. Komórki linii megakarioblastycznej Meg-01 (pbsz Ph⁺) mogą być przydatne jako model do badania procesu megakariocytopoezy. Na powierzchni komórek Meg-01 jest eksponowana glikoproteina GpIIb/IIIa (CD41a), charakterystyczna dla megakariocytów (Mk) i płytek. W syntezie komponenty cukrowej GpIIb/IIIa uczestniczy α1,6-fukozylotransferaza (6FucT). W megakariocytopoezie in vitro aktywność enzymu 6FucT koreluje z ekspresją antygenu CD41a. Wiadomo, że białka z rodziny kinaz tyrozynowych Src hamują różnicowanie Mk. A zatem inhibitor kinaz Src, SU6656, może być użyteczny jako czynnik indukujący różnicowanie Mk. Celem pracy była ocena wpływu SU6656 na komórki linii Meg-01.
Materiał i metody. Komórki linii Meg-01 hodowano w podłożu RPMI 1640 z 10% FBS. SU6656 stosowano w stężeniu końcowym 1 μM oraz 2,5 μM w 0,1% DMSO. W wybranych dniach hodowli oceniano żywotność, gęstość, fenotyp (FACS), morfologię i ploidię (FACS) komórek oraz oznaczano aktywność enzymu 6FucT (metoda izotopowa).
Wyniki. W komórkach linii Meg-01 hodowanych w obecności SU6656 obserwowano hamowanie proliferacji przy równoczesnej indukcji różnicowania komórek. Analiza morfologiczna uwidoczniła pojawianie się w hodowli dużych komórek z wielopłatowym jądrem oraz licznymi ziarnistościami w cytoplazmie. Fenotypowanie komórek potwierdziło zmiany w ekspresji, takich antygenów powierzchniowych Meg-01, jak CD41a, GPA, CD36, CD71. Inhibitor stymulował proces endomitozy. Obserwowane przemiany w komórkach Meg-01, w tym również wzrost aktywności 6FucT, były zależne od stężenia oraz od czasu ekspozycji na działanie SU6656.
Wnioski. Selektywny inhibitor kinaz Src, SU6656, hamuje proliferację komórek linii megakarioblastycznej Meg-01 a jednocześnie indukuje zmiany w morfologii, fenotypie, ploidii oraz aktywności 6FucT świadczące o różnicowaniu i dojrzewaniu komórek.

Summary
Introduction. Megakaryoblastic cell line Meg-01 (CML Ph⁺) may provide a useful model for the study of megakaryocytopoiesis. Glikoprotein GpIIb/IIIa (CD41a), characteristic for megakaryocytes (Mks) and platelets, appears on the surface on Meg-01 cells. Synthesis of the glycans of the GpIIb/IIIa complex involves α1,6-fucosyltransferase (6FucT). The activity of 6FucT correlates with the expression of antigen CD41a in ex vivo megakaryocytopoiesis. It is a known fact that the Src protein family tyrosine kinases blocks Mks differentiation. Therefore, SU6656, inhibitor of Src kinases may be used as differentiation-inducing agent for Mks. The aim of the study was to analyse the effect of SU6656 on cell line Meg-01.
Material and methods. The cells of Meg-01 line were cultured in RPMI 1640 with 10% FBS. SU6656 was used in final concentration of 1 μM and 2.5 μM in 0.1% DMSO. The cells were monitored for vitality, density, phenotype (FACS), morphology, ploidy (FACS) and activity of 6FucT (isotopic method).
Results. In Meg-01 cells grown in the presence of SU6656 the proliferation was blocked and simultaneously the differentiation of cells was induced. The analysis of morphology showed the presence in culture of large cells with multiplicated of nuclei and greater number of granules in cytoplasm. The changes in the expression of surface antigens Meg-01 cells, such as CD41a, GPA, CD36, CD71 were confirmed by the phenotyping. The inhibitor induced the process of endomitosis. The observed changes in Meg-01 cells, as well the increased the activity of 6FucT, depended on the concentration and time of exposure to SU6656.
Conclusions. SU6656 the selective inhibitor of Src kinases, inhibits the proliferation of megakaryoblasic cell line Meg-01 and simultaneously induces changes in morphology, phenotype, ploidy and the activity of 6FucT which confirm the differentiation and maturation of cells.

To jest tylko fragment artykułu. Aby przeczytać całość, przejdź do Czytelni medycznej.